Transwell檢測細(xì)胞遷移

在現(xiàn)在的科研研究中，最初的研究基本上就是高通量篩選對照組和實(shí)驗(yàn)組的差異表達(dá)基因，然后進(jìn)行大樣本的熒光定量PCR驗(yàn)證，確定差異基因與某種疾病的相關(guān)性。在之后的研究中，我們就要針對差異基因進(jìn)行干擾或過表達(dá)來進(jìn)行細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)。其中通過Transwell進(jìn)行細(xì)胞遷移的檢測是比較重要的方法。
一、服務(wù)介紹

細(xì)胞遷移是指細(xì)胞在接收到遷移信號(hào)或感受到某些物質(zhì)的梯度后而產(chǎn)生的移動(dòng)。細(xì)胞遷移為細(xì)胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細(xì)胞體尾部收縮在時(shí)空上的交替過程。細(xì)胞遷移是正常細(xì)胞的基本功能之一，是機(jī)體正常生長發(fā)育的生理過程，也是活細(xì)胞普遍存在的一種運(yùn)動(dòng)形式。胚胎發(fā)育、血管生成、傷口愈合、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、動(dòng)脈粥樣硬化、癌癥轉(zhuǎn)移等過程中都涉及細(xì)胞遷移。檢測細(xì)胞遷移能力的實(shí)驗(yàn)包括劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)。

二、實(shí)驗(yàn)原理

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是簡捷測定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)與修復(fù)能力的方法，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間是一種簡單易行的檢測細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的方法，實(shí)驗(yàn)成本低，可以用來檢測貼壁生長腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。Transwell的基本原理是將transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱為上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱為下室，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔，上室內(nèi)添加上層培養(yǎng)液，下室內(nèi)添加下層培養(yǎng)液。將細(xì)胞種在上室內(nèi)，由于膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細(xì)胞，從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對細(xì)胞生長、運(yùn)動(dòng)等的影響。

三、實(shí)驗(yàn)流程

劃痕實(shí)驗(yàn)

1. 用marker筆在6孔板背后均勻得劃橫線；

2. 在孔中加入細(xì)胞；

3. 第二天用槍頭垂至于背后的橫線劃痕；

4. 用PBS洗去處劃下的細(xì)胞，培養(yǎng)不同時(shí)間，取樣，拍照；

5. 數(shù)據(jù)處理：每個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞整體遷移距離=每個(gè)時(shí)間點(diǎn)距離長度-0時(shí)距離；

6. 結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。

Transwell實(shí)驗(yàn)

1. 采用未鋪 Matrigel 膠的 Transwell 小室用于實(shí)驗(yàn)；

2. 制備細(xì)胞懸液；

3. 接種細(xì)胞；

4. 檢測穿過的細(xì)胞數(shù)；

5. 結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析。

四、客戶提供

細(xì)胞株(凍存株或培養(yǎng)好的細(xì)胞)，所需藥品，藥物處理方式和濃度。

五、公司提供

基本實(shí)驗(yàn)步驟、圖片、數(shù)據(jù)分析結(jié)果、剩余藥品。

實(shí)驗(yàn)周期：大約2-3周左右，具體需要根據(jù)細(xì)胞生長情況及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。