劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲、遷移

在現(xiàn)在的科研研究中，最初的研究基本上就是高通量篩選對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的差異表達(dá)基因，然后進(jìn)行大樣本的熒光定量PCR驗(yàn)證，確定差異基因與某種疾病的相關(guān)性。在之后的研究中，我們就要針對(duì)差異基因進(jìn)行干擾或過(guò)表達(dá)來(lái)進(jìn)行細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)。其中通過(guò)T劃痕實(shí)驗(yàn)進(jìn)行細(xì)胞侵襲、遷移的檢測(cè)是比較重要的方法。


細(xì)胞劃痕是一種簡(jiǎn)單易行的檢測(cè)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的方法，實(shí)驗(yàn)成本低，可以用來(lái)檢測(cè)貼壁生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。

細(xì)胞劃痕內(nèi)容：

材料：6 孔板（其他的也可以，但感覺6孔比較好，大小適中）、marker筆直尺、20微升槍頭（滅菌）、無(wú)血清培養(yǎng)基、PBS

步驟：所有能滅菌的器械都要滅菌，直尺和marker筆在操作前紫外照射30min（超凈臺(tái)內(nèi)）

1．先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻得劃?rùn)M線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過(guò)孔。每孔至少穿過(guò)5條線。

2．在空中加入約5X105個(gè)細(xì)胞，具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同，掌握為過(guò)夜能鋪滿。

3．第二天用槍頭比著直尺，盡量垂至于背后的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜。

4．用PBS洗細(xì)胞3次，去處劃下的細(xì)胞，加入無(wú)血清培養(yǎng)基。

5．放入37度5%co2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)。按0，6，12，24小時(shí)取樣，拍照。

細(xì)胞劃痕注意事項(xiàng)：

一般做劃痕實(shí)驗(yàn)，都是在無(wú)血清或者底血清狀態(tài)下培養(yǎng)的，否則細(xì)胞增殖就不能忽略。

按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕，可以形成若干交叉點(diǎn)，作為固定的檢測(cè)點(diǎn)，這就解決了前后觀察時(shí)位置不固定的問(wèn)題。