劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲、遷移

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劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲、遷移

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在現(xiàn)在的科研研究中,最初的研究基本上就是高通量篩選對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的差異表達(dá)基因,然后進(jìn)行大樣本的熒光定量PCR驗(yàn)證,確定差異基因與某種疾病的相關(guān)性。在之后的研究中,我們就要針對(duì)差異基因進(jìn)行干擾或過(guò)表達(dá)來(lái)進(jìn)行細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)。其中通過(guò)T劃痕實(shí)驗(yàn)進(jìn)行細(xì)胞侵襲、遷移的檢測(cè)是比較重要的方法。


細(xì)胞劃痕是一種簡(jiǎn)單易行的檢測(cè)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的方法,實(shí)驗(yàn)成本低,可以用來(lái)檢測(cè)貼壁生長(zhǎng)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。

細(xì)胞劃痕內(nèi)容:

材料:6 孔板(其他的也可以,但感覺6孔比較好,大小適中)、marker筆直尺、20微升槍頭(滅菌)、無(wú)血清培養(yǎng)基、PBS

步驟:所有能滅菌的器械都要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺(tái)內(nèi))

1.先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻得劃?rùn)M線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過(guò)孔。每孔至少穿過(guò)5條線。

2.在空中加入約5X105個(gè)細(xì)胞,具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同,掌握為過(guò)夜能鋪滿。

3.第二天用槍頭比著直尺,盡量垂至于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不能傾斜。

4.用PBS洗細(xì)胞3次,去處劃下的細(xì)胞,加入無(wú)血清培養(yǎng)基。

5.放入37度5%co2培養(yǎng)箱,培養(yǎng)。按0,6,12,24小時(shí)取樣,拍照。

細(xì)胞劃痕注意事項(xiàng):

一般做劃痕實(shí)驗(yàn),都是在無(wú)血清或者底血清狀態(tài)下培養(yǎng)的,否則細(xì)胞增殖就不能忽略。

按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕,可以形成若干交叉點(diǎn),作為固定的檢測(cè)點(diǎn),這就解決了前后觀察時(shí)位置不固定的問(wèn)題。



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