早期人肺免疫細(xì)胞的發(fā)育及其在上皮細(xì)胞命運(yùn)中的作用

        對人類肺部發(fā)育的研究主要集中在上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的類型和功能上，但對發(fā)育中的肺部免疫細(xì)胞知之甚少，盡管氣道是出生后粘膜免疫的主要部位。一個(gè)懸而未決的問題是，組織駐留免疫細(xì)胞是否在組織在子宮內(nèi)發(fā)育過程中，在塑造組織方面發(fā)揮著重要作用。在這里，我們使用 scRNA-seq、smFISH 和免疫組織化學(xué)對人類胚胎和胎兒肺中免疫細(xì)胞進(jìn)行了分析。在胚胎階段，我們觀察到了早期的先天免疫細(xì)胞波動，包括先天淋巴細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞、髓系細(xì)胞和譜系祖細(xì)胞。在管狀階段，我們檢測到表達(dá)高水平細(xì)胞毒性基因的初始 T 淋巴細(xì)胞和成熟 B 淋巴細(xì)胞（包括 B-1 細(xì)胞）的存在。我們的分析表明，胎兒肺提供了B細(xì)胞完全成熟的環(huán)境。鑒于發(fā)育過程中免疫細(xì)胞的存在和多樣性，我們還研究了它們對上皮成熟的可能影響。我們發(fā)現(xiàn)IL-1β在體外驅(qū)動上皮祖細(xì)胞自我更新并分化為基底細(xì)胞。在體內(nèi)，在整個(gè)肺和上皮尖端附近發(fā)現(xiàn)了產(chǎn)生 IL-1β 的髓系細(xì)胞，這表明免疫細(xì)胞可能指導(dǎo)人肺上皮的發(fā)育。

        該研究于2023年12月發(fā)表在《Science immunology》，IF：24.8。

技術(shù)路線：

結(jié)果:

1、人類胎兒肺部的免疫細(xì)胞隨著發(fā)育時(shí)間變化

        在這項(xiàng)研究中，我們檢查了正在發(fā)育的胎兒期的人類肺部，在細(xì)胞和分子水平上分析免疫細(xì)胞，并研究免疫細(xì)胞信號對上皮分化的影響（圖 1A)。我們的單細(xì)胞測序數(shù)據(jù)最初被描述為廣泛定義的免疫細(xì)胞類型（圖 1B）。先天細(xì)胞和祖細(xì)胞類型在發(fā)育早期更為普遍，包括先天淋巴細(xì)胞 (ILC)、自然殺傷細(xì)胞 (NK) 和髓系細(xì)胞。隨著發(fā)育時(shí)間的推移，B和T淋巴細(xì)胞的比例逐漸增加。 IHC 顯示，CD45+ 免疫細(xì)胞在整個(gè)早期發(fā)育過程中都存在于人胎兒肺部中（圖 1C），并且位于所有肺部區(qū)域，包括內(nèi)皮、上皮和間質(zhì)。全肺組織切片的定量（圖 1，C 至 E）顯示，免疫細(xì)胞比例在 8 pcw 時(shí)最高，隨后下降，然后在 20 pcw 時(shí)上升至小管階段的 9% 左右。我們得出的結(jié)論是，胎兒肺中存在一個(gè)復(fù)雜且動態(tài)變化的免疫區(qū)室。

2、使用 scRNA-seq 對免疫細(xì)胞進(jìn)行分子表征

        為了全面表征胎兒肺免疫細(xì)胞的亞群，我們提取了妊娠8、9、12和20周的整個(gè)胎兒肺（n = 19），并在進(jìn)行單細(xì)胞RNA測序（scRNA-seq）之前通過熒光激活細(xì)胞分選（FACS）富集CD45+免疫細(xì)胞（圖1A）。使用10X Chromium 5′ scRNA-seq對胎兒肺免疫細(xì)胞進(jìn)行了分析，其中一部分樣本還用于進(jìn)行CITE-seq蛋白質(zhì)測量，其質(zhì)量控制度量見圖S2（A和B）。我們對所有樣本進(jìn)行了α/β TCR-seq，并對一部分樣本進(jìn)行了γ/δ TCR和BCR測序。為了最大程度地發(fā)現(xiàn)細(xì)胞類型和狀態(tài)，我們將這些數(shù)據(jù)與我們先前的整個(gè)胎兒肺scRNA-seq數(shù)據(jù)的免疫組分結(jié)合起來。經(jīng)過質(zhì)量控制和整理，我們獲得了總計(jì)77,559個(gè)高質(zhì)量的轉(zhuǎn)錄組文件，涵蓋了所有已知的白細(xì)胞系譜，包括B和T淋巴細(xì)胞、ILC、NK細(xì)胞、髓樣細(xì)胞以及上述系譜的早期祖細(xì)胞（圖2A）。還鑒定了非免疫細(xì)胞，如上皮細(xì)胞、紅細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞，這些細(xì)胞可能是CD45抗體非特異性結(jié)合的細(xì)胞，我們將其包含在我們的數(shù)據(jù)對象中。

        我們對所有階段的單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行了注釋和整理，根據(jù)標(biāo)記基因表達(dá)（圖2A）注釋了59個(gè)細(xì)胞類型/狀態(tài)的簇。早期祖細(xì)胞，包括前前體B細(xì)胞、淋巴-多能祖細(xì)胞（LMPPs）、ILC祖細(xì)胞（ILCPs）、巨核紅細(xì)胞祖細(xì)胞（MEPs）、共同髓系祖細(xì)胞（CMPs）、巨核細(xì)胞祖細(xì)胞和T細(xì)胞祖細(xì)胞主要存在于較早的階段（圖2，B到D）。

        我們的單細(xì)胞RNA測序結(jié)果以及后續(xù)的流式細(xì)胞術(shù)驗(yàn)證顯示，隨著發(fā)育的進(jìn)行，總T細(xì)胞（CD3+）、CD4+、CD8+和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的豐度顯著增加（圖2，E和F）。我們還通過IHC在12和20周胚胎時(shí)在組織切片中驗(yàn)證了T、NK和B細(xì)胞類型的存在。

        總體而言，免疫細(xì)胞的比例呈雙相模式，8周胚胎時(shí)較高，20周胚胎時(shí)再次升高（圖1D）。第二個(gè)峰值可能部分歸因于血管成熟。因此，我們使用PECAM1作為評估發(fā)育中肺血管比例的替代讀數(shù)。定量PCR（qPCR）顯示PECAM1表達(dá)在胚胎期、假腺期和管狀期都有顯著增加。考慮到從12周胚胎后其相對恒定的每細(xì)胞表達(dá)，該分析表明在管狀期，血管細(xì)胞的比例確實(shí)增加。因此，免疫細(xì)胞數(shù)量的動態(tài)增加與血管組織的增加相一致。

        這促使我們檢查了來自肺血管與組織駐留的免疫細(xì)胞比例。我們使用了整個(gè)樣本染色和定量免疫組化以及10X Visium數(shù)據(jù)的組合，以確定血管內(nèi)與組織駐留免疫細(xì)胞的比例（圖1E）。我們發(fā)現(xiàn)在研究的所有階段，大多數(shù)免疫細(xì)胞都是組織駐留的。

3、人類胎兒肺中的B細(xì)胞發(fā)育環(huán)境

        在研究B細(xì)胞組分時(shí)，我們能夠檢測到胎兒肺中B細(xì)胞的所有發(fā)育階段，包括LMPP/ELP（CD34+EBF1?），前前B細(xì)胞（EBF1+SPINK2+VPREB1+），原始B細(xì)胞（DNTT+），大前B細(xì)胞（IL7R+MS4A1+MKI67+），小前B細(xì)胞（IL7R+SPIB+MKI67?），未成熟B細(xì)胞（MS4A1+IGHDloIGHMhiVPREB3hi）和成熟B細(xì)胞（MS4A1+IGHDhiIGHMhiVPREB3lo）（圖3，A到C）。我們根據(jù)簇特異性基因定義了更精確的細(xì)胞亞型：NEIL1+MKI67?晚期原始B細(xì)胞；RAG1+MS4A1+ 原始B細(xì)胞/前B細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞；表達(dá)免疫球蛋白κ（IGKC+）或λ（IGLC2+IGLC3+）輕鏈基因的小前B細(xì)胞簇；表達(dá)代用輕鏈標(biāo)記IGLL1的MS4A1+晚期前B細(xì)胞，IGLL1是前BCR的組成部分；以及CD5?與CD5+成熟B細(xì)胞。軌跡分析（圖3B）顯示了與已知B細(xì)胞成熟生物學(xué)一致的線性趨勢，從前前B細(xì)胞到原始B細(xì)胞，前B細(xì)胞，未成熟B細(xì)胞和成熟B細(xì)胞階段的發(fā)展（圖3C中的細(xì)胞標(biāo)記），關(guān)鍵基因動態(tài)變化（圖3D）。正如預(yù)期的那樣，B細(xì)胞成熟的后期與MS4A1（CD20）和IgD的出現(xiàn)相一致（圖3，C和D）。

        最初認(rèn)為B細(xì)胞的成熟主要發(fā)生在胎兒骨髓，但最近的研究表明B細(xì)胞中間體也可在胎兒皮膚、腎臟和腸道中檢測到。在這里，我們展示了代表B細(xì)胞發(fā)育軌跡的所有群體也可以在胎兒肺中找到。為了了解它們是來自循環(huán)系統(tǒng)，可能是從骨髓“滲漏”出來的，還是在現(xiàn)場發(fā)育的，我們進(jìn)行了smFISH和IHC，并觀察到不同階段的發(fā)育中的B細(xì)胞聚集在一起（圖3E）。RNAscope顯示VPREB1+DNTT+細(xì)胞代表pro-B細(xì)胞階段，RAG1+BEST3+小前B細(xì)胞以及MS4A1+成熟B細(xì)胞，而CD31、EpCAM和CD20在連續(xù)的組織切片上的染色表明這些B細(xì)胞系列細(xì)胞映射到血管外的空間。綜合起來，我們的研究結(jié)果強(qiáng)烈證明B細(xì)胞在胎兒肺中局部發(fā)育，支持最近的觀點(diǎn)，即B淋巴細(xì)胞的發(fā)育可以發(fā)生在外周，而不僅限于胎兒骨髓等主要造血器官。

        為了進(jìn)一步表征胎兒肺中的成熟B細(xì)胞群體，我們檢查了Ig同種型的表達(dá)和克隆擴(kuò)張。PRDM1的轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)缺失（圖3C）證實(shí)我們的數(shù)據(jù)集不包含任何漿細(xì)胞，表明在人類胎兒肺中不發(fā)生T細(xì)胞依賴的B細(xì)胞激活和分化。成熟的CD5+細(xì)胞的最終階段以CD5、CD27、SPN（CD43）、CCR10和CCL22標(biāo)記（圖3C）。

4、胎兒肺部的 T、NK 和 ILC 細(xì)胞

        在進(jìn)一步研究淋巴細(xì)胞系譜的過程中，我們確定了傳統(tǒng)和非傳統(tǒng)T細(xì)胞、ILCs和NK細(xì)胞（圖4A）。CD4、CD8和調(diào)節(jié)性T（Treg）細(xì)胞表達(dá)了既有天然T細(xì)胞又有記憶T細(xì)胞的特征（圖4B）。我們確定了胎兒的“天然”T細(xì)胞，它們與成年人中相應(yīng)的天然T細(xì)胞存在差異。胎兒特異的天然T細(xì)胞基因一直表達(dá)到新生兒結(jié)束的時(shí)候，表明即使在出生后，天然T細(xì)胞仍在不斷成熟。

        通過表達(dá)標(biāo)記基因(HPN和SCN1B)確定了ILCPs的聚類。一個(gè)重要的問題是這些ILCPs是否代表了所有ILC亞型或特定亞型的局部前體。通過主成分分析（PCA）將樣本進(jìn)行了分組（圖4C）。在PC1與PC2的圖中，ILCPs與ILC3s共定位，而ILC2s主要與NK亞型共定位；沒有識別到ILC1群。這表明，在肺部，ILCPs可能只能產(chǎn)生ILC3s而不能產(chǎn)生ILC2s。

        為了進(jìn)一步探索我們的數(shù)據(jù)，我們將我們的胎兒肺免疫群體與其他發(fā)育器官的免疫細(xì)胞整合在一起（圖4D），從而使我們能夠搜索在發(fā)育肺中富集的細(xì)胞鄰域（圖4E）。與其他相似發(fā)育階段的胎兒組織相比，ILCs和NK細(xì)胞在胎兒肺中顯著富集。與其他胎兒器官相比，肺ILCPs和中間NK細(xì)胞差異表達(dá)與細(xì)胞周期正調(diào)控相關(guān)的基因（圖4F），表明這些前體/分化中間體處于增殖狀態(tài)，并且胎兒肺可能為擴(kuò)展這些細(xì)胞系提供了一個(gè)生長環(huán)境，與近期在小鼠發(fā)育中的發(fā)現(xiàn)一致。

5、胎兒肺部髓系部分的發(fā)育

        在我們的數(shù)據(jù)集中，我們分別檢查了巨噬細(xì)胞（圖5，A和B）和樹突狀細(xì)胞發(fā)育的軌跡。所有胎齡的細(xì)胞都存在于所示的所有粒細(xì)胞種群中，反映了持續(xù)的粒細(xì)胞成熟?；诜謪^(qū)圖的圖形抽象（PAGA）和RNA速度分析表明，從HSC/MPP到CMPs的分化逐漸進(jìn)行，經(jīng)過前單核細(xì)胞和單核細(xì)胞種群（S100A12hi CD14+、S100A12lo CD14+和CD16+），然后是不斷成熟的巨噬細(xì)胞（MΦ）細(xì)胞類型（CXCL2+巨噬細(xì)胞、APOE+巨噬細(xì)胞和巨噬細(xì)胞）（圖5，C和D）。沿發(fā)育軌跡的前100個(gè)差異表達(dá)基因的綜合分析揭示了造血和/或分化過程中調(diào)節(jié)的關(guān)鍵調(diào)控基因和標(biāo)記基因的時(shí)間表達(dá)模式（圖5F）。

        在我們的數(shù)據(jù)集中，我們檢測到許多我們使用RNAscope在空間上驗(yàn)證的早期前體細(xì)胞。這包括罕見的SMIM24+SPINK2+細(xì)胞，可能是HSCs，以及基于它們的典型標(biāo)記基因表達(dá)確定的GMPs、CMPs、前單核細(xì)胞、髓細(xì)胞、MEPs、巨核細(xì)胞前體和巨核細(xì)胞等髓系前體細(xì)胞（圖5，G和H）。根據(jù)對IHC圖像的手動定量，大多數(shù)髓細(xì)胞，由其CD68的表達(dá)定義，是組織駐留的（圖5，I和J）。綜合的軌跡分析和成像數(shù)據(jù)表明，隨著發(fā)育的推移，髓系細(xì)胞繼續(xù)進(jìn)入胎兒肺，在那里進(jìn)一步分化。特別是巨噬細(xì)胞相比其他胎兒器官表達(dá)更高水平的與細(xì)胞周期相關(guān)的基因，這表明胎兒肺可能提供了一個(gè)增殖的生長環(huán)境（圖5K）。

6、IL-1β導(dǎo)致尖端干細(xì)胞退出自我更新狀態(tài)并分化為胎兒肺類器官中的基底細(xì)胞

        在人類發(fā)育中的肺中，遠(yuǎn)離的上皮尖端由SOX9+的前體細(xì)胞組成，它們產(chǎn)生所有肺泡和氣道系列細(xì)胞。在確定了免疫細(xì)胞存在于發(fā)育中的整個(gè)肺部后，我們探究了哪些免疫細(xì)胞位于上皮尖端周圍，以及它們可能對上皮成熟，特別是對尖端前體的影響。免疫組織化學(xué)（IHC）顯示CD45+免疫細(xì)胞分布在整個(gè)胎兒肺和SOX9+上皮尖端附近（圖6A），在8-9和20周孕時(shí)，與12周孕時(shí)相比，更多的免疫細(xì)胞聚集在尖端周圍（圖6B），這可能反映了我們先前在這些時(shí)間點(diǎn)觀察到的雙峰高峰（圖1，C和D）。為了研究免疫-上皮的相互作用，我們使用已發(fā)表的大規(guī)模RNA測序數(shù)據(jù)將5-9周孕的肺上皮尖端來源的器官樣體與新鮮切取的6-7周孕的尖端進(jìn)行比較。上皮尖端前體表達(dá)了幾種細(xì)胞因子受體，包括IL-1、IL-4、IL-6、IL-13、IL-17、IL-22、干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子（TNF）和轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）的受體（圖6C）。我們在新鮮的上皮尖端和器官樣體中發(fā)現(xiàn)了類似的表達(dá)模式?；诒磉_(dá)的受體，我們篩選了相應(yīng)細(xì)胞因子在培養(yǎng)的器官樣體中的效應(yīng)。

        遠(yuǎn)離的上皮尖端細(xì)胞在擬腺期（約5到16周孕）始終共表達(dá)SOX2和SOX9。我們使用SOX2和SOX9作為標(biāo)記物來研究我們的細(xì)胞因子組對器官樣體的影響。最初，器官樣體用細(xì)胞因子（10 ng/ml）處理7天，之后我們觀察到IL-1β和IL-13導(dǎo)致SOX9表達(dá)顯著下降，而SOX2沒有受到顯著影響（圖6D）。為了更詳細(xì)地研究免疫-上皮的相互作用，我們主要關(guān)注了研究IL-1β信號對器官樣體的影響。

        首先，我們評估了器官樣體表面的IL-1受體1（IL-1R1）的存在。對于IL-1β信號傳導(dǎo)，需要IL-1R1和一個(gè)輔助蛋白（IL-1RAcP）。整個(gè)染色顯示器官樣體和體內(nèi)胎兒肺上皮中均表達(dá)IL-1R1和IL-1RAcP（圖6E），證實(shí)了IL-1β信號傳導(dǎo)的可能性。鑒于兩個(gè)受體組分都存在，我們在存在IL-1β的條件下培養(yǎng)器官樣體更長的時(shí)間。經(jīng)過14天的IL-1β處理后，我們觀察到SOX9顯著減少，SOX2增加（圖6F），表明IL-1β導(dǎo)致尖端前體從自我更新狀態(tài)向分化狀態(tài)撤離。在檢查氣道分化標(biāo)記物時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)TP63的表達(dá)顯著增加，KRT5的增加無顯著性差異（兩者都是基底細(xì)胞的標(biāo)記物），但在SCGB3A1、SCGB3A2、MUC5AC或纖毛細(xì)胞標(biāo)記物FOXJ1的表達(dá)上沒有影響（圖6G）。

        基于我們對IL-13效應(yīng)的觀察（圖6D），以及先前的研究表明ILC可以分泌IL-13，以及ILC在胎兒肺中富集（圖4E），我們將器官樣體用IL-13處理了14天，以比較其對尖端細(xì)胞的影響與IL-1β的影響。IL-13處理導(dǎo)致SOX9和SOX2顯著減少，TP63和KRT5無顯著性增加（圖6F和G），表明對氣道分化有類似的影響。然而，IL-13和IL-1β對分泌細(xì)胞系標(biāo)記物表達(dá)的影響是不同的：IL-13處理導(dǎo)致MUC5AC和MUC5B減少，而IL-1β處理在大多數(shù)重復(fù)中顯著增加了MUC5B（圖6G）。IL-1β處理器官樣體的效應(yīng)在蛋白水平上也通過整體染色（圖6H）和Western blotting（圖6I）得到確認(rèn)。這些結(jié)果表明IL-1β促使尖端前體細(xì)胞從自我更新狀態(tài)中退出，通過下調(diào)SOX9和增加SOX2的表達(dá)，然后導(dǎo)致腫瘤蛋白P63（TP63）的增加，從而支持向基底細(xì)胞的分化。

        IL-1β的補(bǔ)充與DSA結(jié)合可導(dǎo)致肺器官樣體中成熟基底細(xì)胞標(biāo)記物keratin 5（KRT5）顯著增加（圖6J和K），表明分泌IL-1β的免疫細(xì)胞促進(jìn)成熟基底細(xì)胞分化，并可能與分泌TGF-β/BMP-4的間充質(zhì)細(xì)胞共同起作用。為了進(jìn)一步確認(rèn)IL-1信號在分化中的作用，我們還測試了IL-1β抑制的效果。通過IL-1受體攔截劑（IL-1Ra）阻斷IL-1受體增加了增殖（Ki67+細(xì)胞）和器官樣體的大小，而IL-1β減小了器官樣體的大小和增殖，這表明IL-1信號在決定前體細(xì)胞命運(yùn)中起著重要作用。無論是在干性還是分化中。MAPKKK蛋白激酶TGF-β激活激酶1（TAK1）介導(dǎo)IL-1激活信號通路中c-Jun N-末端激酶和核因子κB的激活。（5Z）-7-Oxozeaenol是TAK1的強(qiáng)效抑制劑，也顯著減弱了IL-1β誘導(dǎo)的基底細(xì)胞標(biāo)記物誘導(dǎo)，進(jìn)一步證實(shí)了IL-1信號的關(guān)鍵作用（圖6L）。

7、胎兒肺部的髓系細(xì)胞分泌 IL-1β

        在確立了IL-1β信號具有改變發(fā)育中肺上皮細(xì)胞命運(yùn)的能力后，我們試圖在體內(nèi)確定可能是IL-1β來源的免疫細(xì)胞。成年人體內(nèi)IL-1β的主要來源是血液單核細(xì)胞、組織巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞。我們首先使用RNAscope在體內(nèi)胎兒肺中確認(rèn)了IL1B+免疫細(xì)胞的存在（圖7A）。在我們的單細(xì)胞數(shù)據(jù)集中，前五個(gè)表達(dá)最高的細(xì)胞類型占所有IL1B的75%以上（圖7B和C）。胎兒DC2細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞顯示出IL1B最高的表達(dá)（圖7B和C）。我們更仔細(xì)地研究了發(fā)育中肺中DC和巨噬細(xì)胞的空間和時(shí)間分布，使用CD1C作為DC2細(xì)胞的標(biāo)記物，使用巨噬細(xì)胞甘露糖受體CD206作為巨噬細(xì)胞的標(biāo)記物（圖7D和E）。我們在整個(gè)發(fā)育過程中在胎兒肺組織中識別了CD1C+ DC2細(xì)胞和CD206+巨噬細(xì)胞，并發(fā)現(xiàn)DC和巨噬細(xì)胞直接接觸SOX9+上皮尖端前體。此外，我們還觀察到單核細(xì)胞和/或中性粒細(xì)胞靠近發(fā)育中的上皮（圖7F）。通過體外培養(yǎng)每種細(xì)胞類型7天，使用優(yōu)化條件分析了培養(yǎng)上清液，我們從19到21周胎兒肺中分離了DC和巨噬細(xì)胞，并研究了它們的細(xì)胞因子分泌，使用Human Cytokine Antibody Array (Abcam)（圖7H和I）。兩種細(xì)胞類型都分泌了幾種細(xì)胞因子，特別是IL-1β、IL-8、IL-6、IL-10、TNF-α和TNF-β。

        這些數(shù)據(jù)證實(shí)了發(fā)育中的胎兒肺中存在能夠分泌IL-1β的DC和巨噬細(xì)胞。IL-6和TNF-α最初通過器官樣體處理7天進(jìn)行了測試（圖6D），對SOX9或SOX2的表達(dá)沒有影響。IL-8通過CXCR1和CXCR2受體信號傳導(dǎo)，而這兩者在上皮尖端均不表達(dá)（圖6C），因此IL-8信號傳導(dǎo)可能不會直接影響發(fā)育中的上皮。IL-10信號需要IL-10受體的兩個(gè)組分（α和β），但在上皮前體和器官樣體中只表達(dá)IL-10Rβ（圖6C），這表明IL-10也不能直接影響上皮尖端。盡管IL-8和IL-10不能直接對上皮發(fā)揮信號作用，但它們可能影響招募和激活發(fā)育中胎兒肺中存在的其他免疫細(xì)胞，因此可能間接影響上皮?？偟膩碚f，我們已經(jīng)證明了能夠分泌IL-1β的免疫細(xì)胞駐留在上皮尖端附近，這表明免疫細(xì)胞具有引導(dǎo)發(fā)育中肺上皮的能力。

實(shí)驗(yàn)方法：

        IHC、FACS、scRNA-seq、CITE-seq、遺傳供體分離、類器官、細(xì)胞因子治療、雙 SMAD 激活。

參考文獻(xiàn)：

        Barnes JL, Yoshida M, He P, et al. Early human lung immune cell development and its role in epithelial cell fate. Sci Immunol. 2023;8(90):eadf9988.